发明专利
| 基本信息 | |
| 标题 | 多拷贝高效表达重组菌丝霉素的毕赤酵母 |
| 申请日 | 2010-09-26 00:00:00.0 |
| 申请专利权人 | 188bet平台app官方 饲料研究所 |
| 发明设计人 | 王建华;杨雅麟;张军;滕达;王少然 |
| 摘要 | 本发明公开了一种多拷贝表达重组菌丝霉素的毕赤酵母的制备方法。该方法包括：根据毕赤酵母翻译的密码子偏爱性，设计出菌丝霉素表达基因的序列；将优化的菌丝霉素基因融合在表达载体pPICZαA的α-因子信号肽C端，构建单拷贝表达载体，该载体含有由起始信号元件醇氧脱氢酶强启动子(AOX)、α-因子信号肽基因及融合在其C端的菌丝霉素基因和终止信号元件AOX(TT)等组成的菌丝霉素表达盒；利用限制性内切酶BglII和BamHI粘性末端能互补的原则，通过反复酶切、连接和转化操作，获得含菌丝霉素基因的不同拷贝串联表达盒的重组质粒，电转化毕赤酵母后，在甲醇诱导下能高效分泌表达菌丝霉素，表达量与菌丝霉素基因拷贝数之间存在线性关系。本发明所构建的多拷贝高表达酵母细胞可用于提高产量、降低成本，适于菌丝霉素的规模化生产。 |