| 摘要 |
本发明公开了一种转基因油菜Topas 19/2事件外源插入载体旁侧序列及其应用，涉及生物工程技术领域中转基因油菜的检测。本发明以转基因油菜品种Topas 19/2为材料，利用Invitrogen公司GenomeWalker试剂盒构建基因组文库，并利用引物：TOPLB－1：5’TCGCCCAATAGCAGCCAGTCCCTTCC 3’和TOPLB－2：5’AGTCCCTTCCCGCTTCAGTGACAACG 3’与试剂盒提供的接头引物进行PCR扩增，获得Topas 19/2事件外源插入载体旁侧序列，序列为SEQ NO.1。其中第1－550位碱基与插入载体序列相同，第551－823位碱基与插入载体无同源性，为油菜基因组序列。根据插入载体序列和油菜基因组序列的接合序列，设计了引物TOPLG：5’CGGCCTTAATCCCACCCCAG 3’和TOPLV：5’AGTTCCAAACGTAAAACGGCTT 3’以及TaqMan探针TOPLP：5’FAM－TCCCGGTCATATATCAGCGCCGGTC－TAMRA 3’，建立了转基因油菜外源基因整合事件Topas 19/2的事件特异性定性、定量检测方法。本发明可以进一步用于建立转基因油菜Topas 19/2的其他事件特异性PCR检测方法研究。 |
